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杜鵑紅山茶(camelliaazaleawei)為我國特有的瀕危植物,僅見于陽春鵝凰嶂自然保護區內。本研究通過種群生態學、繁殖生物學和遺傳多樣性等多途徑的綜合研究,展現了杜鵑紅山茶瀕危的內在機制與外在因素,并開展了組織培育快繁技術研究。重要研究成果總結如下:
1.杜鵑紅山茶群落位于溪流兩岸,為以山茶科、茜草科和樟科等植物類群為優勢的次生性常綠闊葉林。植物區系以泛熱帶因素為優勢。
2.杜鵑紅山茶種群小,以iii和iv級植株為主,缺乏大樹和幼苗,種群結構呈衰退型。杜鵑紅山茶的生態位寬度中等,重要居于灌木層,并與灌木層優勢種有較高的生態位重疊。
3.杜鵑紅山茶具四囊型花藥,腺質絨氈層;藥壁發育為基本型;小孢子發育為同時型;小孢子四分體四周體形:花粉粒成熟時具二細胞;具雙珠被的倒生胚珠,薄珠心;胚囊發育屬雙孢八核蔥型。胚胎檢測效果解釋,杜鵑紅山茶在大孢子發生及胚囊發育歷程中,胚珠敗育率達65%。
4.雜交指數(oci)、花粉一胚珠比(p/o)和控制授粉試驗效果顯示,杜鵑紅山茶的繁育系統為專性異交型,自交不親和,為典型的蟲媒傳粉型植物。授粉試驗效果還解釋,自然授粉的結實率很低,人工異株授粉可有用提高結實率。野外觀測發現,杜鵑紅山茶在自然條件下子房敗育率高達64%。杜鵑紅山茶具有兩型花柱,有利于接受異花花粉的l型花僅占20%,而易于發生白花授粉的m型花柱占76%。杜鵑紅山茶的有用傳粉昆蟲重要為蝶類和蜂類,但昆蟲的訪花頻率較低,這可能是導致自然授粉結實率低的重要緣故原因。
5.杜鵑紅山茶自然結實率低,土壤層種子少,林下實生苗窮困。種子質量及活力檢測效果顯示,杜鵑紅山茶豐滿種子僅占調查總數的40%,其中有活力種子比例為73%。種子萌發試驗效果解釋,杜鵑紅山茶新鮮種子的均勻萌發率僅為38%。自然結實率低、種子質量差以及種子向幼苗的轉化率低,直接限制了杜鵑紅山茶種群的生計和生長,成為其種群更新的大瓶頸。
6.rapd和issr分解效果解釋,杜鵑紅山茶遺傳多樣性較低。物種程度上的多態性位點百分率(ppb)劃分為38.83%和55.29%,nei’s基因多樣性指數劃分為0.1435和0.2191,shannon多態性信息指數劃分為0.2140和0.3215。杜鵑紅山茶種群的絕大部門遺傳變異存在于兩個亞種群內,亞種群間的變異量很少,gsr值劃分為0.1242和0.0922。聚類分解的效果解釋,杜鵑紅山茶兩亞種群間有較高的遺傳相似性。
7.組培實驗的效果解釋,腋芽增殖是杜鵑紅山茶異地繁殖的有用途徑。以杜鵑紅山茶種子在室內環境條件下萌發生長的實生苗為質料,切取帶有腋芽的莖段作為外植體,可以實現種苗的快速繁殖。實用于誘導腋芽萌發及生長的培育基配方為:ms+ba1.omg/l+iba0.01mg/l+ga310mg/l+蔗糖2.5%,該培育基可使腋芽萌發率到達60%。實用于誘導芽條生根的培育基配方為:1/2ms+iba1.omg/l+活性炭0.5%+蔗糖1.5%,在接種前用10mg/l的iba溶液浸泡芽條基部20-30min可以收到更好的效果。在誘導杜鵑紅山茶胚狀體形成時,以靠近成熟或已經成熟的胚為外植體的培育效果較好。硫酸鹽和硝酸鹽的含量和比例對杜鵑紅山茶胚狀體再生植株具有重要影響,將胚狀體轉移到因素為ms+nh4n0310.31mmol/l+kn039.39mmol/l+k2s041.5mmol/l+ba2.0mg/l+iba0.2mg/l+谷氨酸1.0mg/l的培育基上,可以取得比標準ms培育基更好的培育效果,胚芽分化率到達了8.3%。
8.綜合以上研究效果,杜鵑紅山茶瀕危的內在機制有4點:1)大孢子的發生及胚囊發育歷程中出現嚴重敗育,造成大量不育種子的發生。2)自交不親和性和花柱異長現象導致高子房敗育率。3)傳粉昆蟲訪花頻率低導致自然結實率低。4)種子質量差,休眠期長,種子向幼苗的轉化率低。杜鵑紅山茶致瀕的外在因素重要是人類活動的滋擾和水電站的滋擾。根據上述研究效果,我們對杜鵑紅山茶提出了加強就地及遷地保護的措施,配合人工授粉和快速繁育技術研究,找出有用擴大種群的途徑。
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