月季是薔薇屬的木本花卉,有“花中皇后”的美譽(yù),深受人們的喜歡.為我國十臺(tái)甫花之一,在我國有30多個(gè)城市將其選為市花。抗寒月季是近幾年選育出來的能夠適應(yīng)北方嚴(yán)寒天氣特點(diǎn)的新的月季品種,以其花大,色艷、花期長被北方園林綠化彩化中普遍應(yīng)用，但由于其繁殖以扦插繁殖為主，繁殖速度慢，滿足不了生發(fā)生長的需要，而組織培育可在短期內(nèi)得到大量的優(yōu)良種苗，為此，我們于2003~2021年開展了抗寒月季組培快繁的研究工作。1材料與方式1.1材料 試驗(yàn)所用的材料為長春市園林科學(xué)研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。1.2方式1．2．1外植體的準(zhǔn)備 取生長結(jié)實(shí)優(yōu)良母株上帶有腋芽的嫩莖，摘除葉片和嫩刺，用自來水沖洗清潔后，用浸有75%的酒精棉球擦拭外面5~10S，剪成3~5cm左右的莖段，在超凈工作臺(tái)上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，無菌水沖洗3~5次，再用無菌濾紙吸干外面水分，切成帶有1個(gè)或2個(gè)腋芽的莖段接種到培育基中。1．2．2腋芽的分化與增殖 把外植體劃分接種于添加6-BA和NAA的MS培育基上舉行起始培育，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)成立無菌快速繁殖無性系，再將無菌小苗剪切成1~2cm左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培育基中舉行繼代增殖培育，培育一準(zhǔn)時(shí)間后對小苗的增殖與生長情況舉行觀測統(tǒng)計(jì)分解，培育基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培育溫度(25+-3)，每天光照為11~12小時(shí)，光照強(qiáng)度1000~1500LX。1．2．3生根與移栽 將增殖后長勢興旺、節(jié)間紳長適度的無根小苗轉(zhuǎn)接到1/2MS培育基中誘導(dǎo)生根，30天后觀測生根情況。 生根后的試管苗在常溫下煉苗5~7天，移栽到草碳+珍珠巖(體積比為1∶1)的基質(zhì)中，待成活后小苗高達(dá)10cm左右移到田間栽植。2效果與討論2．1腋芽分化 將外植體接種到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培育基上培育7天后，大部格外植體開始萌動(dòng)，10天腋芽膨大顯著，隨后長出嫩芽形成無根芽從。 為選擇出不同質(zhì)量濃度6-BA對誘導(dǎo)腋芽分化的影響，以MS為基本培育基配制7種附加不同質(zhì)量濃度(劃分為0.10.51.01.52.03.04.0)的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導(dǎo)培育基,每組培育基接種40個(gè)外植體,培育40天觀測其腋芽分化情況(見表1)。 表1解釋,月季腋芽分化率與培育基中6-BA質(zhì)量濃度呈拋物線關(guān)系,6-BA由0.1增添至3.0時(shí)腋芽分化率顯著提高,以3.0為較高,腋芽分化率達(dá)77.5%;當(dāng)6-BA的質(zhì)量繼續(xù)增添時(shí),其腋芽分化率則顯著下降;6-BA質(zhì)量濃度為0.1時(shí)其腋芽分化率較低,僅為7.5%;6-BA質(zhì)量濃度為5.0時(shí),其腋芽分化率只為15%,可見,培育基中6-BA質(zhì)量濃度為1.5~3.0時(shí)有利于誘導(dǎo)腋芽分化,尤其以2.0~3.0時(shí)為較佳。2.2繼代增殖培育 取自統(tǒng)一種培育基上長勢、大小平等的繼代培育芽和莖段，同時(shí)接種到不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA的MS培育基中，培育30天后舉行觀測并統(tǒng)計(jì)效果(見表2)。 由表2可以看出，在NAA質(zhì)量濃度相同而6-BA質(zhì)量濃度不同的處理中，隨著6-BA濃度的升高(1.5~3.0)芽苗的增殖倍數(shù)也相應(yīng)提高，NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數(shù)高達(dá)6.6~6.8倍；可見，培育基中6-BA質(zhì)量濃度為3.0、NAA質(zhì)量濃度為0.05時(shí)為較佳的誘導(dǎo)腋芽分化的處理組合。2．3生根培育 無菌芽苗在分化與增殖培育基中只誘導(dǎo)地上部門，既不停地分枝增殖，曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開花現(xiàn)象，但均不易生根。因此，將原來培育基中的大量元素減半(既1/2MS)，并去除BA舉行根的誘導(dǎo)。效果在無菌苗根的誘導(dǎo)歷程中，生長素的種類和使用濃度起決議性作用，為此對不同種類的生長素NAA、IBA、A、IAA的根效應(yīng)作對比試驗(yàn)，效果解釋，NAA、IBA匹敵寒月季無菌苗誘根效應(yīng)顯著優(yōu)于IAA，但兩者之間不同不顯著，用IAA舉行根的誘導(dǎo)，芽苗基部長出較多的愈傷組織，發(fā)根率低，且發(fā)根量少，移栽成活率下降，這可能是由于生長過多的愈傷組織影響根系維牽制的發(fā)育所致，為為了解NAA和IBA的適宜質(zhì)量濃度，舉行了NAA和IBA的質(zhì)量濃度試驗(yàn)，劃分設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質(zhì)量濃度舉行比較，培育30天后觀測根系生長情況，表3解釋，以1/2MS(大量元素用量減半)+NAA和1/2MS(大量元素用量減半)+IBA培育基對月季根的誘導(dǎo)效果均較為理想，而且濃度都在0.3-0.75mg/l范圍內(nèi)較為適合，但以NAA為較佳。其中NAA生根率較高達(dá)92%，移栽成活率高達(dá)89%，IBA的生根率也高達(dá)90%，移栽成活率達(dá)87%。 將小苗接種到上述培育基中10天后其基部傷口基本愈合，18天則長出許多小白根，培育30天發(fā)根率均達(dá)90%以上，且長有3條以上，長度達(dá)2.0cm以上白根的占80%以上。2．4煉苗移栽 在生根培育基中，無菌苗生長迅速，植株逐漸結(jié)實(shí)起來，其根系生長尤為迅速，在多數(shù)根系長達(dá)1.0cm，其根尖仍保持興旺生長狀態(tài)，此時(shí)即可進(jìn)入太過種植(煉苗)階段，移栽前先將瓶苗移出恒溫培育室，在常溫下置于較強(qiáng)散射光中煉苗7天，打開瓶蓋后繼續(xù)煉苗2~7天，然后小心取出放入清水中洗濯清潔，注重少傷根，移栽到以草碳土+珍珠巖(體積比1∶1)的基質(zhì)中，澆透水并覆蓋塑料膜，保持相對濕度85~90%，溫度15~25℃，10天后逐漸揭膜煉苗，15~20天可將塑料膜所有揭除，并澆施營養(yǎng)液彌補(bǔ)營養(yǎng)，其成活率一般可達(dá)70%以上，待小苗長至10~15cm左右時(shí)，就可移植到田間定植。